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Zur Analyse von vitaminhaltigen alkoholfreien Getränken werden HPLC-Methoden erfolgreich eingesetzt. Diese lassen sich jedoch meist nicht auf die in Würze- und Biermatrix vorliegenden Konzentrationen übertragen.

Zur Analyse von Vitamin B₁ und B₂ wird ein Reagenzienkit zur Bestimmung der Vitamine B₁ und B₂ in Vollblut der Firma Chromsystems GmbH/München verwendet. Die Applikationen zeichnen sich durch eine einfache Durchführbarkeit sowie einen geringen apparativen Aufwand aus, da ein isokratisches HPLC-System genügt. Die Anwendung der Applikation wurde in Zusammenarbeit mit dieser Firma in Hinsicht auf die veränderte Probenmatrix (Maische, Würze und Bier) modifiziert.

Der VitaFast® Vitamin B₂ (Riboflavin) Mikrotiterplattentest ist ein mikrobiologisches Verfahren zur Bestimmung des Gesamtgehaltes an Vitamin B₂ in Lebensmitteln und Getränken.
Zur Bestimmung des zugesetzten Vitamin B₂ wird das Getränk enzymatisch vorbehandelt und anschließend heiß extrahiert und falls erforderlich mit sterilem Wasser aus dem Testkit verdünnt.
Zur Bestimmung des Gesamtgehaltes an Vitamin B₂ (natürliches und zugesetztes) muss die Probe durch eine enzymatische Hydrolyse aufgeschlossen werden.

Das Vitamin-B₂-Assay-Medium und der verdünnte Extrakt werden in die Kavitäten einer Mikrotiterplatte gegeben, die mit Lactobacillus rhamnosus beschichtet sind. Lactobacillus rhamnosus ist auf die Anwesenheit von Vitamin B₂ angewiesen. Nach Zugabe von Vitamin B₂ als Standard oder als in einer Probe enthaltenes Vitamin wächst der Keim solange, bis das Vitamin aufgebraucht ist. Die Inkubation erfolgt bei 37 °C für 44‑48 h.
Das Wachstum von Lactobacillus rhamnosus in Abhängigkeit vom Vitamin B₂ wird als Trübung gemessen und mit einer Standardkonzentrationsreihe verglichen. Die Messung erfolgt im Mikrotiterplattenphotometer bei 610‑630 nm (alternativ bei 540‑550 nm).

Vitamin B₂, Riboflavin und Riboflavin-5-Monophosphat werden mittels Umkehrphasen-HPLC getrennt und mit einem Fluoreszenz-Detektor bestimmt.

Vitamin B₆ wird mit Ionenpaar‑RP‑HPLC getrennt und über UV-Absorption detektiert. Die Quantifizierung erfolgt über den Vergleich mit externen Standards. Die Identität der Substanzen kann, falls erforderlich, über einen Spektrenvergleich bestätigt werden.

Die Carotinoide werden mit Lösungsmittel extrahiert. Aus dieser Lösung wird der Gesamtcarotinoid-Gehalt photometrisch bestimmt. Nach dem Aufnehmen in Ethanol wird der Gehalt an β-Carotin und α-Carotin mittels HPLC durch Trennung an einer C30-Phase bestimmt. Der Gehalt an Vitamin A wird anschließend berechnet.

Die petroletherlöslichen Carotinoide werden beim Klären mit Carrez-I- und Carrez-II-Lösung quantitativ mit Zinkhexacyanoferrat (II) adsorptiv ausgefällt. Aus dem Niederschlag werden sie mit Aceton herausgelöst und anschließend in Petrolether überführt. Aus dieser Petroletherlösung wird der Gesamtcarotinoid-Gehalt photometrisch bestimmt.